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使用皇冠|体育|投注定氮法测定蜂王浆粗蛋白

     1.原理     
    以浓硫酸消化分解蛋白质,其中的氮变成氨,再与硫酸化合生成硫酸铵。生成的硫酸铵与氢氧化钠反应再生成氨,用蒸馏法使氨蒸出,用标准浓度的硫酸溶液与其反应,剩余的硫酸再经氢氧化钠标准溶液滴定,从实际消耗的酸量可推算出生成的氨量。 
      2.仪器与试剂 
      (1)仪器:分析天平(0.000 lg)、50ml皇冠|体育|投注烧瓶、皇冠|体育|投注定氮半微量蒸馏装置1套、滴定装置1套。 
     
     (2)试剂: 
      浓硫酸(分析纯,密度1.84)。 
      硫酸铜与硫酸钾混合试剂:称取5水硫酸铜1g、硫酸钾10g,置于研钵中混合均匀,研细备用。 
      混合指示剂:量取0.1%次甲基红乙醇溶液2份和0.1%溴甲酚绿乙醇溶液3份,临用时混合。 
      2%硼酸溶液:称取硼酸2g,量取混合指示剂2ml、乙醇20ml,置于锥形瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至100ml,摇匀备用。 
      40%氢氧化钠溶液:称取氢氧化钠40g,加蒸馏水溶解并稀释至100ml。 稀硫酸:量取浓硫酸5.7ml,加蒸馏水稀释至100ml。 
      0.1 mol/L盐酸标准溶液的配制和标定: 
      配制:量取浓盐酸溶液9ml,加蒸馏水稀释至1000ml,摇匀备用。 
      标定:准确称取在270 -300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.15g,置于150ml锥形瓶中,加蒸馏水50ml使其溶解,滴入混合指示剂10滴,用被标定的盐酸溶液滴定,至溶液由绿色变为紫红色时,煮沸2min,冷却至室温,继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色为终点。 
      使用前,用蒸馏水将0.1 mol/L盐酸溶液准确稀释10倍,配制成0.01 mol/L的盐酸溶液。
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      3.测定方法 
      (1)消化:准确称取蜂王浆样品约1g,放入干燥的皇冠|体育|投注烧瓶内,加入2g硫酸铜与硫酸钾混合试剂,再沿瓶壁缓缓加入61ml浓硫酸,在瓶口放一小漏斗,使烧瓶成45°斜放,在通风橱内置于电炉上加热消化(先小火缓缓加热,使溶液温度保持在沸点以下,等暴沸停止后,逐步加大火力)。待消化液呈清澈的亮绿色后,再继续加热30min,消化即可完毕(消化时间约为lh),冷却后备用。 
      (2)蒸馏:量取2%硼酸溶液10ml置于100ml的锥形瓶中,加入混合指示剂2滴和少量稀硫酸,将冷凝管尖端浸入液面下。然后,将皇冠|体育|投注烧瓶中的消化液经由漏斗移人蒸馏器中,用少量蒸馏水淋洗皇冠|体育|投注烧瓶和玻璃漏斗数次。向蒸馏器中加入40%氢氧化钠溶液约25ml之后,再加入5ml蒸馏水(一半流入蒸馏器,一半在玻璃杯中作水封)。用调温电炉加热开始蒸馏。待锥形瓶内溶液的颜色由酒红色变为蓝绿色时,继续蒸馏10min,将冷凝管尖端提出液面,使蒸汽继续冲洗1 min,用少量蒸馏水淋洗尖端,停止蒸馏。 
      (3)滴定:用0.01 mol/L的盐酸溶液滴定锥形瓶中吸收的氨量,滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫红色为终点,并作空白试验校正。 
      4.计算       
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鉴于手工操作比较繁琐,推荐使用皇冠|体育|投注皇冠|体育|投注定氮仪KN680进行测定,全自动操作,
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